Analityka i bioanalityka

Laboratorium zapewnia zaawansowaną aparaturę pomiarową oraz specjalistyczną wiedzę niezbędną do realizowania prac badawczo-rozwojowych z zakresu analizy związków nisko- oraz wielkocząsteczkowych z wykorzystaniem technik spektrometrii mas oraz chromatografii cieczowej, jak również spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR).

Analityka z wykorzystaniem spektrometrii mas oraz chromatografii cieczowej

• rozwój, opracowanie, walidacja oraz transfer metod analitycznych i bioanalitycznych technikami chromatografii cieczowej sprzężonej ze spektrometrią mas oraz chromatografii cieczowej z klasycznymi detektorami DAD oraz FLD
• analiza ilościowa związków organicznych metodami LC-MS/(MS) oraz UHPLC-DAD i UHPLC-FLD
• bioanaliza związków niskocząsteczkowych w matrycach biologicznych
• profilowanie, identyfikacja oraz oznaczenie zwartości aktywnych substancji farmaceutycznych oraz leków

Analityka z wykorzystaniem spektroskopii NMR

• identyfikację związków organicznych techniką NMR – badanie jakościowe zgodnie z normą ISO 17025:2018-02; metoda akredytowana przez Polskie Centrum Akredytacji, akredytacja AB 1661
• ilościowe oznaczanie związków organicznych techniką NMR w zakresie 10-100% zgodnie z normą ISO 17025:2018-02; metoda akredytowana przez Polskie Centrum Akredytacji, akredytacja AB 1661
• określanie współczynników dyfuzji związków niskocząsteczkowych oraz polimerów z wykorzystaniem spektroskopii NMR
• wykonanie pomiarów NMR wraz z możliwością przygotowania próbki w roztworze (eksperymenty typu 1D 1H NMR, 13C NMR, 31P NMR, 19F NMR i 2D COSY, NOESY, HSQC, HMBC, DOSY oraz wiele innych), a także ciele stałym (MAS NMR, CP MAS NMR), z dostępem do surowych danych online.
• określanie rozmiarów cząsteczek, biomolekuł (białek, DNA) oraz analiza ciekłych lub rozpuszczonych próbek polimerów z wykorzystaniem spektroskopii NMR DOSY
• badania interakcji molekularnych, tworzenia miceli, mechanizmów wymiany z wykorzystaniem spektroskopii NMR DOSY
• analiza materiałów stałych (MAS NMR), takich jak minerały, materiały kompozytowe, gleby czy materiały porowate

Proteomika i analiza białek

Laboratorium zapewnia specjalistyczne analizy proteomiczne w strategii bottom up wspomagane przeszukiwaniem białkowych baz danych:

• identyfikacja białek: analiza shotgun, analiza po frakcjonowaniu przy użyciu techniki SDS PAGE
• identyfikacja modyfikacji posttranslacyjnych
• globalna różnicowa analiza ilościowa białek w trybie bez znakowania izotopowego (analiza typu label free) lub z wykorzystaniem znaczników izotopowych (TMT)
• identyfikacja oraz analiza dystrybucji białek w tkankach

Dodatkowo laboratorium zapewnia zaawansowaną analizę białek z wykorzystaniem spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR):

• określanie rozmiarów białek
• określanie współczynników dyfuzji białek
• badania interakcji białko-ligand spektroskopią NMR (HSQC, STD), do wykrywania interakcji między białkami (w zakresie 0,1-1,0 mg/ml) a ligandami (w zakresie 0,1-1 mM)
• wyznaczanie miejsca wiązania ligandu do białka znakowanego izotopem 15N lub o częściach ligandu, które oddziałują z nieznakowanym białkiem

Metabolomika

Laboratorium zapewnia specjalistyczne analizy metabolomiczne bazujące na metodach spektrometrii mas oraz spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR):

• profilowanie i identyfikacja metabolitów w próbkach klinicznych i materiale tkankowym
• profilowanie i identyfikacja metabolitów w płynach biologicznych i ekstraktach komórkowych
• identyfikacja oraz analiza dystrybucji metabolitów w tkankach

Mikroskopia

Laboratorium świadczy szeroki zakres usług, obejmujący zarówno etap obrazowania przy pomocy technik mikroskopii elektronowej i świetlnej, jak również etapy preparatyki próbek oraz analizy uzyskanych wyników.

Szczegółowa oferta laboratorium obejmuje:

• wysokorozdzielcze obrazowanie SEM próbek biologicznych (tkanki, drobne organizmy, hodowle komórkowe, wirusy, preparaty białkowe), przy użyciu detektorów elektronów wtórnych, wstecznie rozproszonych oraz w trybie STEM
• obrazowanie nienapylonych próbek przy niskich napięciach przyspieszających (poniżej 1 kV)
• analizę składu pierwiastkowego techniką mikroanalizy rentgenowskiej EDS (widmo, skan liniowy, mapa EDS)
• wykonywanie i obrazowanie przekrojów FIB preparatów zatopionych, utrwalonych lub mrożeniowych
• preparatykę próbek biologicznych na potrzeby mikroskopii SEM i TEM/STEM oraz FIB: preparatyka konwencjonalna, napylanie próbek, suszenie w punkcie krytycznym, przygotowanie półcienkich oraz ultracienkich skrawków przy użyciu ultramikrotomu
• zaawansowane metody preparatyki próbek biologicznych, tym techniki barwienia wewnątrzbloczkowego (en bloc, OTO) oraz zatapianie hodowli komórkowych na potrzeby przekroju FIB (ultra-thin resin embedding)
• opracowanie dedykowanej metody preparatyki, obrazowania oraz analizy obrazów zgodnie z oczekiwaniami klienta
• współpracę w zakresie wykonania badań korelacyjnych (CLEM, CLEM-FIB)
• analizę danych obrazów mikroskopowych

Biologia komórkowa i molekularna

Nasze laboratorium dysponuje w pełni wyposażoną pracownią cytometrii przepływowej wspierającą projekty badawcze w specjalistycznych analizach komórkowych oraz sortowaniu komórek. Oprócz klasycznych analiz komórkowych oferujemy również możliwość ich połączenia z bioobrazowaniem. W skład naszej oferty wchodzą:

• analiza procesów biologicznych, zachodzących w żywych komórkach i tkankach
• obrazowanie utrwalonych hodowli komórkowych i preparatów tkankowych
• przygotowanie próbek materiału tkankowego i barwienia histologiczne
• analizy z wykorzystaniem cytometrii i przepływowej oraz sortowanie komórek

Spektrometry mas oraz chromatografy cieczowe

Wysokorozdzielczy spektrometr mas Orbitrap Exploris 480 (Thermo Scientific)

• źródła jonów: HESI, nanoESI
• moduł ruchliwości jonów FAIMS
• sprzężony z chromatografem cieczowym Vanquish Neo (Thermo Scientific)

Niskorozdzielczy spektrometr mas LCMS-8045 (Shimadzu) typu QqQ

• analizator mas: potrójny kwadrupol
• źródło jonów: ESI
• fragmentacja: CID
• sprzężony w ultra-wysokosprawnym chromatografem cieczowy Nexera X2 (Shimadzu)

Ultra-wysokosprawny chromatograf cieczowy Ultimate 3000 (Thermo Fisher Scientific)

• detektor z matrycą diodową (DAD)
• detektor fluorescencyjny (FLD)

Spektrometr mas LTQ Orbitrap Elite (Thermo Scientific)

• źródła jonór: HESI, nanoESI, APCI
• moduł ruchliwości jonów FAIMS
• sprzężony z chromatografem cieczowym Easy nanoLC 1000/Ultimate 3000 (Thermo Scientific)

Licencjonowane oprogramowanie do analiz proteomicznych

• Proteome Discoverer 3.0 (Thermo Scientific), Peaks Studio (Bioinformatics Solutions Inc.), Mascot

Spektrometry NMR

Spektrometr NMR Avance III HD 500 MHz (Bruker)

• autosampler na 60 pozycji
• sondy szerokopasmowe do pomiarów w roztworach: BBI i BBO
• przystawka do pomiarów zmiennotemperaturowych w zakresie od -150 do 150 ^oC (BCUII oraz dewar N2(l))

Spektrometr NMR Avance III HD 600 MHz (Bruker)

• aurosampler na 16 pozycji
• sonda szerokopasmowa do pomiarów w roztworach: BBFO (z możliwością pomiarów jąder ¹⁹F)
• sondy szerokopasmowe do pomiarów w ciele stałym: CP MAS 1.3 i 3.2 mm
• sonda 4 kanałowa do pomiarów homogentaów i próbek półpłynnych: HR MAS 4 mm
• przystawka do pomiarów zmiennotemperaturowych w zakresie od -150 do 150 ^oC (BCUII oraz dewar N2(l))

Spektrometr NMR Avance III HD 700 MHz (Bruker)

• autosapler na 24 pozycje
• sonda szerokopasmowa do pomiarów w roztworach: BBO
• sondy 3 kanałowe do pomiarów w roztworach: TXI (P i N)
• kriosonda 4 kanałowa do pomiarów w roztworach: QCI
• przystawka do pomiarów zmiennotemperaturowych w zakresie od -150 do 150 ^oC (BCUII oraz dewar N2(l)), dla sondy QCI zakres temperatur wynosi od -40 do 80 ^oC

Mikroskop elektronowy oraz mikroskopy konfokalne

Dwuwiązkowy skaningowy mikroskop elektronowy SEM/FIB Zeiss Auriga 60

• system CrossBeam, kolumna jonowa Cobra
• działo elektronowe z emisją polową (FEG), praca przy napięciach 0,1-30 kV
• detektory: SE2, InLens, BSD, ESB, STEM, EDS (X-Max Oxford Instruments)
• GIS: Pt, W, H2O, izolator
• moduł cryo SEM/FIB Quorum Technologies

Preparatyka mikroskopii elektronowej

• ultramikrotom Leica EM UC7, z komorą kriogeniczną Leica FC7
• napylarka wysokopróżniowa Leica EM ACE 600
• suszarka w punkcie krytycznym Leica EM CPD 300

Mikroskop konfokalny Zeiss Cell Observer SD

• statyw odwrócony
• moduł spinning disk Yokogawa CSU-X1A 5000
• lasery: 405, 488, 561, 639 nm
• 2 kamery EMCCD QImagingRolera EM-C2 (Dual Camera)
• obiektywy: 10x (NA 0,30), 20x (NA 0,4 LD), 25x (NA 0,80 W), 40x (NA 0,6 LD; NA 1,20 W; NA 1,4 Oil), 63x (NA 1,20 W; NA 1,4 Oil), 100x (NA 1,46 Oil)
• zmotoryzowany stolik skaningowy z modułem Definite Focus
• inkubator XLmulti S1, wkładka grzewcza do płytek 96-dołkowych
• kontroler temperatury oraz stężeń O2 i CO2

Mikroskop konfokalny Leica SP8 MP

• statyw prosty
• skaner konwencjonalny i rezonansowy (8 kHz)
• lasery VIS: 405, 488, 552, 638 nm
• laser IR: ChameleonVision II, pulsy femtosekundowe, długość fali regulowana w zakresie 680-1080 nm
• detektory: 4 wewnętrzne PMT, 1 detektor HyD, 4 zewnętrzne NDD-PMT
• obiektywy: 10x (NA 0,40), 20x (NA 0,75), 25x (NA 0,95 W), 40x (NA 1,10 W; NA 1,3 Oil), 63x (NA 1,4 Oil)
• zmotoryzowany stolik skaningowy
• kontroler temperatury i wkładka grzewcza do naczyń Petriego
• zestaw do przyżyciowego obrazowania myszy laboratoryjnych

Cytometry przepływowe oraz sorter komórkowy

Cytometr przepływowy LRSForesssa (Becton Dickinson)

• 4 lasery: 355 nm , 405nm , 488 nm, 640 nm
• model pracy: High-throughput (HT), Standard throughput (STD)
• komora przepływowa: 180 x 430 μm prostokątna komora przepływowa kwarcowa
• szybkość gromadzenia danych: 40 000 events/sekunda

Cytometr przepływowy BD FACSCanto II (Becton Dickinson)

• 3  lasery: 405 nm solid state diode, 488nm solid, 633 nm HeNe
• model pracy: High-throughput (HT), Standard throughput (STD)
• komora przepływowa: 180 x 430μm prostokątna komora przepływowa kwarcowa
• szybkość gromadzenia danych: 10 000 events/sekunda

Sorter komórkowy FACSAria Fusion (Becton Dickinson)

• 5 laserów: 355 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm, 640 nm
• sortowanie zbiorcze oraz pojedynczych komórek
• sortowanie indeksowe
• komora bio-safety

Laboratorium usługowe Centrum Nauk o Życiu i Biotechnologii Łukasiewicz – PORT we Wrocławiu łączy specjalistyczne usługi z wiedzą ekspercką, dostarczając rozwiązania dopasowane do potrzeb naszych klientów. Szczegółowe informacje o możliwościach współpracy oraz ofertach cenowych dostępne są pod adresem: zapytania@port.lukasiewicz.gov.pl